培养基常用的灭菌方法

2022-07-05 17:33:17

培养基常用的灭菌方法

   培养基是适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。按营养成分和用途不同，分为基础、合成、营养、鉴别、选择和厌氧培养基。按物理形态分为固体、半固体和液体三类。根据细菌的种类和培养目的不同，可采用不同的培养基。

1、灭菌方法

    培养基的灭菌方法主要有两种，湿热灭菌及0.22μm微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压蒸汽灭菌的工作强度小，成本较低但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤除菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。

1.1 湿热灭菌
    蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。湿热灭菌的效果取决于致死温度和致死时间。致死温度是杀灭微生物的极限温度。致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
    高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。灭菌时一般是在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。

1.2 过滤灭菌
   可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纤维素、硝酸纤维素等等。一般采用正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有高流速、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。

   目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜、一体式过滤器（囊式过滤器）或筒式滤芯除菌。微孔滤膜需配套不锈钢夹具，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。筒式滤芯亦需配套不锈钢滤壳。如果是少量过滤(<200ml)可选配针头过滤器。